
Qualificação da largura de banda (resolução) do espectrofotômetro UV (265 a 270nm) - Filtros Liquidos
O tolueno em hexano é amplamente utilizado para qualificar
a largura de banda espectral (resolução) de espectrofotômetros UV e é aceito para este propósito pela maioria das farmacopeias e órgãos de padronização. Esta referência compreende duas cubetas de quartzo para UV distante seladas permanentemente por fusão térmica, uma contendo 0,020% v/v de tolueno em hexano e a outra um branco de hexano. A resolução é a capacidade do instrumento de discriminar entre duas bandas de absorbância adjacentes. Isso geralmente é expresso como a largura de banda espectral (SBW) do instrumento, que descreve a faixa de comprimentos de onda provenientes da fenda de saída do monocromador. A precisão da absorbância medida dependerá da razão entre a SBW e a largura de banda natural (NBW) da substância absorvente. Para atender aos requisitos da farmacopeia, o instrumento a ser testado deve ter uma largura de banda espectral que não exceda 1,8 nm (EP) ou 2,0 nm (USP).
O espectro UV do tolueno em hexano mostra uma absorbância máxima em 269 nm e uma mínima em 267 nm:

Tolueno em Hexano

A razão entre o pico máximo em 269 nm e o mínimo em 267 nm fornece uma medida da largura de banda do instrumento. Razões típicas para diferentes larguras de banda (a 20 °C) são:

Nota: Estes valores são apenas para orientação. Os valores reais constam no certificado de calibração.

Referência de tolueno em metanol para Espectroscopia Derivada (EP)
Esta referência é descrita em versões anteriores da Farmacopeia Europeia como um teste de resolução para uso em espectroscopia de derivados. Consiste em uma solução de tolueno a 0,020% v/v em metanol, permanentemente selada por fusão térmica em uma célula de quartzo para UV distante, com um branco de metanol.
O espectro da segunda derivada mostra um pequeno extremo negativo ( ) em 265 nm entre dois extremos negativos maiores em 261 nm e 268 nm.

Se o instrumento estiver funcionando corretamente, a relação A/B deve ser maior que 0,2
Referência de vapor de benzeno – Larguras de banda inferiores a 1 nm
Esta referência é útil como verificação de resolução para instrumentos com larguras de banda espectrais inferiores a 1 nm. 0,01 ml de benzeno líquido é selado por fusão térmica em uma célula de quartzo de grau UV. À temperatura ambiente, o benzeno está na fase vapor.
Espectros de vapor de benzeno em várias larguras de banda espectral
(SBWs) - deslocadas para maior clareza.

O espectro de vapor de benzeno contém características que podem ou não ser resolvidas, dependendo da largura de banda do espectrofotômetro. Isso é ilustrado nos seguintes espectros:
Nota: O vapor de benzeno pode não funcionar bem com todos os espectrômetros de matriz de fotodiodos, pois a resolução pode ser limitada pelo espaçamento dos diodos da matriz.

